我們先要知道熒光顯微鏡的構造即主要包括哪些核心“配件”。

熒光顯微鏡主要包含或者說可以簡化為熒光光源（激光、LED、汞燈、白激光超連續譜光源等）、熒光濾色塊（不同Chanel通道）、熒光成像所需的相機、以及顯微鏡主體（物鏡）幾個部分。

具體過程為，當單色或寬光譜的光（白激光、LED、汞燈等）經過前方的filter選出不同的通道，再經過二向分色鏡（短波長反射，長波長通過）到物鏡*后到達樣品，由于熒光樣品都是常見的下轉換的熒光材料如DAPI、GFP、RFP等，即短波長激發長波長。后面激發出的熒光再次經過二向色鏡（短反長通）以及另一片filter（將雜光濾掉）到達成像系統即相機或眼睛。

然后，了解了熒光顯微鏡的光路的特點的基礎，我們就可以分析為什么熒光顯微鏡需要校正。

熒光成像是一個復雜的系統，除了需要以上一些核心配件的聯動和配合外，為了拍出更好的效果，光路中不可避免的要加入不同的透鏡、針孔等等，甚至是不同物鏡的取舍。但是這些不同配件件的聯動隨著時間的拉長不可能總是那么好，光源的功率、物鏡完好程度、或者光路中元器件位置的輕微改變，抑或載物臺的略微不平都會*終反應到成像效果上，所以理論上應該定期評估顯微鏡的成像質量進行校正，尤其是對強度有要求的實驗更該如此。

而且據我了解，當下國內的一些平臺也在做類似的工作，不過大家用的*普遍的是熒光beads（熒光微球）來進行測試評估。